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固相載體在ELISA中的作用
固相載體在ELISA中發(fā)揮以下核心作用:
一、提供反應(yīng)界面
固定生物分子?
通過(guò)物理吸附或化學(xué)交聯(lián)將抗原/抗體固定在載體表面(如聚苯乙烯微孔板),形成穩(wěn)定的固相化反應(yīng)界面
維持活性?
載體表面需保持抗原/抗體的免疫學(xué)活性,確保后續(xù)特異性結(jié)合的有效性
二、分離與純化功能
液相-固相分離?
通過(guò)洗滌步驟可選擇性去除未結(jié)合的游離成分,僅保留特異性結(jié)合的免疫復(fù)合物
減少背景干擾?
封閉處理(如BSA封閉)能阻斷載體表面的非特異性結(jié)合位點(diǎn),提高檢測(cè)信噪比
三、信號(hào)放大基礎(chǔ)
酶反應(yīng)載體?
固相化的抗原-抗體復(fù)合物為酶標(biāo)二抗提供結(jié)合位點(diǎn),通過(guò)酶催化底物顯色實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大
定量檢測(cè)平臺(tái)?
顏色反應(yīng)的OD值與目標(biāo)物濃度成正比,固相載體為酶標(biāo)儀提供均一的光學(xué)檢測(cè)平面
四、實(shí)驗(yàn)流程優(yōu)化
標(biāo)準(zhǔn)化操作?
96孔板等標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)計(jì)便于高通量檢測(cè)和自動(dòng)化操作
穩(wěn)定性保障?
固相化處理可使包被的抗原/抗體在4℃保存數(shù)周仍保持活性
注:聚苯乙烯是常用載體材料,因其疏水性表面利于蛋白吸附且透光性良好。
注:以上資料僅供參考,具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或供應(yīng)商。
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